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方法1:
1.1仪器
采用岛津高效液相色谱仪系统,包括:LC-10AT溶剂输送泵(两台)、SPD-10AVVP紫外检测器、CTO-10AVP柱温箱、DGU-12A自动脱气机、SCL-10AVP系统控制器、C-R8A积分仪。
1.2试剂
乙腈、甲醇:色谱纯;水:自备超纯水;样品制备用溶剂为分析纯;异黄酮标准品Daidzin、Genistin、Daidzein、Genistein购自Sigma公司。
1.3样品预处理
1.3.1标准品溶液的配制
精确称取各标准品2.0-4.0mg,置于10ml的烧瓶中,分别加入色谱级甲醇,超声波助溶,移入10ml容量瓶中并定容至刻度,于40C温度下保存备用。
1.3.2样品溶液的制备
精确称取5mg左右的大豆异黄酮样品,置于10ml小烧杯中,加入80%的乙醇溶液,超声波助溶,移入10ml容量瓶中并定容至刻度,转入HPLC专用小瓶中封口,备测。
1.3.3色谱条件
色谱柱:Lichrosper 100RP-18(4.6mm×25mm;5μm);流动相:含0.1%(V/V)冰醋酸的水溶液(A溶液),含0.1%(V/V)冰醋酸的乙腈溶液(B溶液);时间程序:在35min内B溶液浓度从20%线性递增至40%;流量:1ml/min;检测波长:254nm;柱温:400C;进样量:5μl;分析时间:35min/样品。
方法2
2.1仪器
高效液相色谱仪:岛津LC-6A型泵,紫外检测器SPD-6AV,自动进样器SIL-6A,数据处理装置C-R3A。
2.2试剂
甲醇:色谱纯;水:重蒸水;样品制备用酒精为分析纯;异黄酮标准品Daidzin、Genistin、Daidzein、Genistein购自Sigma公司。
2.3样品预处理
2.3.1标准品溶液的配制
精确称取各标准品2.0-4.0mg,置于10ml的烧瓶中,分别加入80%酒精,超声波助溶,移入10ml容量瓶中并定容至刻度,于40C温度下保存备用。
2.3.2样品溶液的制备
精确称取5mg左右的大豆异黄酮样品,置于10ml小烧杯中,加入80%的乙醇溶液,超声波助溶,移入10ml容量瓶中并定容至刻度,转入HPLC专用小瓶中封口,备测。
2.3.3色谱条件
色谱柱:日本岛津公司,Shim-Pack CLC ODS柱(150×6.0mm ID;5μm);流动相为甲醇:醋酸:水=30:3.5:66.5;流速为0-8.5min时1.0ml/min,8.5-47min时1.5ml/min;柱温:500C;检测波长:254nm。
注:以上两种方法仅能测出大豆甙(DAIDZIN)、大豆甙元(DAIDZEIN)、染料木甙(GENISTIN)和染料木素(GENISTEIN)四种成份的含量。
方法3
3.1仪器
高效液相色谱仪:安捷伦HP1100,紫外检测器,四元泵,手动进样器。
3.2试剂
甲醇:色谱纯;水:重蒸水;样品制备用酒精为分析纯;异黄酮标准品大豆甙(Daidzin)、黄豆甙(Glycitin、染料木甙(Genistin)、大豆甙元(Daidzein)、黄豆甙元(Glycitein)、染料木素(Genistein)购自美国Sigma公司。
3.3样品预处理
3.3.1标准品溶液的配制
精确称取各标准品2.0-4.0mg,置于10ml的烧瓶中,分别加入80%酒精,超声波助溶,移入10ml容量瓶中并定容至刻度,于40C温度下保存备用。
3.3.2样品溶液的制备
精确称取3.0-4.0mg左右的大豆异黄酮样品,置于10ml小烧杯中,加入80%的乙醇溶液,超声波助溶,移入10ml容量瓶中并定容至刻度,转入HPLC专用小瓶中封口,备测。
3.3.3色谱条件
色谱柱:美国安捷伦公司,ZORBAX Eclipe XDB-C18柱(150×6.0mm ID;5μm);流动相:色谱级甲醇(A),含5%(V/V)冰醋酸的水溶液(B),流动相梯度见附表;流速:1.0ml/min;柱温:200C;检测波长:254nm。
注:采用此法可以检测六种大豆异黄酮成份的含量,而且具有分离效果好、操作时间短的特点,但对仪器配置的要求较高。
附表:流动相梯度
时间(min) |
流动相A(%) |
流动相B(%) |
备 注 |
0.00 |
30 |
70 |
|
2.00 |
30 |
70 |
|
7.00 |
40 |
60 |
|
7.01 |
29 |
71 |
|
8.00 |
40 |
60 |
|
14.00 |
60 |
40 |
|
21.00 |
30 |
70 |
|